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通过对拟南芥或水稻穗的研磨来提取dna的实验方法

文章出处:admin 人气:发表时间:2018-06-29 14:43

实验目的

对拟南芥或水稻穗进行研磨破碎,进而提取其DNA。

实验原理

通过研磨珠的撞击,充分拟南芥或水稻穗细胞,使其内容物流出,进而提取目标成分。

实验材料和器具

样品:拟南芥或水稻穗

仪器:全自动样品冷冻研磨仪(上海净信,Tissuelyser-48)

耗材:离心管,不锈钢研磨珠(上海净信)

试剂:TPS溶液(100mM Tris-Cl (pH 8.0),10mM EDTA (pH 8.0),1M KCl)

实验步骤

1.取一片拟南芥的叶片(或10d左右的小苗),加入两毫升EP管中。

2.加钢珠1颗

3.加TPS提取液0.02ml

4.设置研磨仪参数10单位频振,1min。(水稻嫩叶设置45S,12单位频振;老叶设置70S,12单位频振)

5.离心(4000rpm,1min),将打碎的组织和提取液一起转移至96孔板中。

6.96孔板加盖子,75°加热15min

7.大离心机高转速10min

8.取上清,转入另一块96孔板,加入等体积的异丙醇。

9.加盖子,混匀

10.4°下10min或-20°下10min,如材料很多此步骤可省略。

11.最高转速离心10min。

12.弃上清,加入0.04ml 70%乙醇。

13.最高转速离心10min

14.弃去乙醇,37°放置20-30min烘干

15.加入0.016ml水,65°放置10min

16.离心除去气泡,之后可以直接用于PCR实验。

实验注意事项

1.-20°下该方法的DNA可以保存4个月以上,4°大致可以放2-3周。

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